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植物提取物之植物多糖成分的纯化和分离方法

编辑: 西安365bet体育在线备用网址 添加时间:2018-05-23 来源:植物提取物

      植物提取物之植物多糖成分的纯化和分离方法
      一、柱色谱法
      1.凝胶过滤(凝胶色谱/分子筛色谱/体积排阻色谱)法
      由于多糖富含氢键,沉淀法易造成多糖絮凝,使结果产品分子量分布过大,难以得到特定分子量或较纯的多糖,而凝胶过滤法则可按分子量分离出令人满意的多糖,成为工业上较常用的手段
      2,活性炭柱色谱
      活性炭吸附量大、效率高,是分离水溶性成分常用的吸附剂。柱色谱时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂,以增加溶液的流速。含糖的水溶液上柱后,先用水洗脱无机盐、单糖等,继而在水中增加乙醇的浓度,逐步洗出二糖、三糖以及更大的低聚糖。由于市售的活性炭中混入金属离子,因此应该预处理除去。一般可用0.2mol/L枸橼酸缓冲液洗涤炭粉或用2~3mol/L盐酸煮沸几次,再用蒸馏水反复洗至中性。
      3.离子交换柱色谱
阳离子和阴离子交换树脂对除去水提液中的酸、碱性成分和无机离子十分有效,除去这些杂质后的中性糖及其苷再作进一步分离。强碱性的树脂能与还原糖结合,用水不能洗脱,而且易进一步引起糖的异构化和降解。而强酸性的树脂易使不稳定的苷键裂解,尤其是呋喃糖苷键更易被裂解。所以在分离糖和苷时宜采用弱酸/弱碱型交联度比较小的离子交换树脂。
中性糖与硼酸形成配合物后,可以增加其酸性,所以经硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂可起到选择性交换的作用。然后用不同浓度的硼酸盐溶液洗脱。此法对糖和低聚糖的分离效果较好,但洗脱体积很大,给后处理带来较大麻烦.
      二、利用溶解度不同的分离方法(沉淀法)
常用的分级沉淀法是混合多糖的浓水溶液中逐步加入乙醇,收集不同醇浓度下析出的沉淀。为了多糖的稳定,常在pH 7进行。但酸性多糖在pH 7条件下-COOH多以-COO-离子形式存在,故需在pH 2~4进行分离。为防止酸水解苷键,操作宜迅速。分级沉淀也可用糖的衍生物,如甲醚、乙酸乙酯,在醇溶液中分次加****等极性更低的溶剂,各次沉淀需经反复溶解与醇析,直至测得物理常数恒定,最常用的是旋光度测定和电泳检查。含盐溶液沉淀法中常用的沉淀剂有:乙醇、钡盐或锌盐(用于硫酸皮肤素)、乙酸钾等。
      三、利用电离性质不同的分离方法
      多糖分子中可电离基团有羟基及硫酸基,而且pK值、立体结构位置及硫酸基相连的基团不一,不同的羟基及硫酸基的pK值又有微小不同。同时,各种多糖中的羟基及硫酸基数量也存在差别,这些差别成为多糖分离的重要依据。常用的方法有:①季铵盐络合法。②电泳分离
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